Molekul cara riset biologi lan nggunakake

Molekuler biologi cara riset muter peran penting ing medicine modern, ilmu Forensic, lan biologi. Thanks kanggo maju ing sinau saka DNA lan RNA, wong iku bisa kanggo njelajah génom saka organisme nemtokake agen causative, kanggo ngenali asam nukleat sing dipengini ing dicampur saka asam, etc.

cara molekul-biologi. Apa iku?

Mbalik ing 70-80s ilmuwan iki pisanan decipher génom manungsa. Iki acara Factorij ing Patani perlune kanggo pangembangan teknik genetis lan biologi molekular. Study of sifat DNA lan RNA wis temenan iku saiki bisa nggunakake iki asam nukleat kanggo tujuan diagnosis penyakit, gene sinau.

Preparation saka DNA lan RNA

Molekuler biologi cara diagnostik mbutuhake miwiti materi: asring iki asam nukleat. Ana sawetara cara kanggo milih bahan kimia iki saka sèl saka organisme urip. Saben wis menehi kaluwihan lan cacat, lan iku kudu dianggep nalika milih cara ngisolasi asam nukleat ing wangun murni.

1. Preparation saka DNA dening Marmur. cara kasusun ing nambani dicampur saka bahan kimia alkohol, precipitates asil DNA murni. Kakurangan saka cara iki nggunakake bahan kimia korosif, fenol lan chloroform.

2. hubungan saka DNA ing boom ing. inti utama sing digunakake kene - iku guanidine thiocyanate (GuSCN). Punika dipun promosiaken ing Deposition saka asam deoxyribonucleic ing bagian ngisor khusus saka kang bisa salajengipun diklumpukake kanthi nyangga khusus. Nanging GuSCN - iku inhibitor ing TCP, lan malah bagean cilik saka sing bakal setor ing DNA bisa pengaruhe mesthi saka reaksi rantai polimerase, kang penting nalika nggarap asam nukleat.

3. udan saka impurities. cara iki béda gedhe-gedhe sadurungé ing molekul piyambak ora setor asam dehoksiribonukleinovoy lan impurities. Kanggo nindakake iki, nggunakake exchangers ion. Kerugian sing ora kabeh bahan kimia bisa dumunung.

4. screening Massa. Cara iki digunakake ing kasus nalika sampeyan ora perlu duwe informasi akurat babagan struktur molekul DNA, lan perlu kanggo sawetara statistik. Alasanipun sing struktur asam nukleat bisa rusak nalika nangani deterjen, utamané alkalies.

Klasifikasi cara riset

Kabeh cara molekul-biologi riset sing dipérang dadi telung klompok utama:

1. Amplification (nggunakake majemuk saka enzim). Iki kalebu PCR - reaksi rantai polimerase, kang peran wigati ing akeh saka cara diagnosis.

2. Neamplifikatsionnye. Pakempalan cara wis kagandhèng karo karya saka campuran asam nukleat. Conto 3 jinis blots, ing situ cara nyangkok, etc.

3. Metode adhedhasar pengakuan sinyal saka molekul satelit, kang ana gegayutané karo sawijining DNA utawa RNA satelit tartamtu. Conto - sistem cara nyangkok Hybride solusi Capture System (hc2).

Enzim sing bisa digunakake ing cara riset biologi molekuler

Akeh Techniques diagnostik molekul ndherek nggunakake sawetara sing godhongé amba saka enzim. Ngisor digunakake paling asring:

1. enzim restriksi - "Cut" molekul DNA kanggo bagéan sing perlu.

2. DNA polimerase - synthesizes molekul asam deoxyribonucleic pindho terdampar.

3. Transkriptase Reverse (mbalikke Transkriptase) - digunakake kanggo synthesize DNA saka cithakan RNA.

4. DNA ligase - tanggung jawab kanggo tatanan saka ikatan phosphodiester antarane nukleotida.

5. exonuclease - mbusak nukleotida saka bagian mburi molekul asam deoxyribonucleic.

PCR - cara dhasar saka nambahi jumlahe DNA

reaksi rantai polimerase (PCR) iki digunakake digunakake ing biologi molekuler modern. Cara iki, kang molekul DNA siji bisa dipikolehi akeh salinan (amplifying molekul).

Fungsi utama saka PCR:

- diagnosis penyakit;

- cloning perangan DNA, Gene.

Kanggo nindakake reaksi rantai polimerase mbutuhake Unsur iki: dhisikan DNA molekul, DNA thermostable polimerase (Taq utawa Pfu), fosfat deoxyribonucleotide (sumber saka dhasar nitrogen), ing primer (2 sepisanan 1 molekul DNA) lan dhewe sistem buffer kang bisa tumindak kabeh reaksi.

PCR kasusun saka telung langkah: denaturation, kang gawe kukuh sepisanan lan elongation.

1. denaturation. Ing suhu 94-95 derajat Celsius proshodit break hidrogen antarane loro rentengan DNA, lan minangka asil kita njaluk loro molekul siji-terdampar.

2. annealed primer. Ing suhu 50-60 derajat celsius ana primer target ing ends saka molekul siji-terdampar nukleat miturut jinis complementarity.

3. Elongation. Ing suhu 72 derajat wis putri disintesis pindho terdampar molekul asam deoxyribonucleic.

urutan DNA

Molekul cara riset biologi sering kawruh saka urutan nukleotida ing molekul asam deoxyribonucleic. Kanggo nemtokake kode genetik dipunupados. mrekso molekul mangsa bakal adhedhasar kawruh gained ing netepake saka urutan manungsa.

Dipuntedahaken jinis urutan:

• urutan dening Maxam-Gilbert;
• Sanger urutan;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe urutan.